БИОХИМИЯ СПОРТА

Abstract

IDENTIFICATION OF LACTATE AND SOME NITRATED SLAGS, EXCRETING BY HUMAN SKIN, WITH A HELP OF ONE PROBE

V.A. Hramov

Volgograd state academy of physical culture

Key words: lactate, nitrated slags, washing out of a skin surface, simplicity and painlessness of procedure.

The purpose of this paper was to inform the specialists about the method to identificate the lactate and some nitrated slags with a help of one simple probe.

The offered method can be used in biochemical investigation, in laboratory practical work for students, of physical culture academies and when scientific ensuring of elite athletes.

The merit of the method is determined by its simplicity and painlessness for subjects, that makes its good prospects for childish batch's study.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ В ОДНОЙ ПРОБЕ ЛАКТАТА И РЯДА АЗОТИСТЫХ ШЛАКОВ, ЭКСКРЕТИРУЕМЫХ КОЖЕЙ ЧЕЛОВЕКА

В.А. Храмов
Волгоградский государственный институт физической культуры

Ключевые слова: лактат, азотистые шлаки, смыв с кожной поверхности, простота и безболезненность процедуры.

Исследование ответных реакций организма на воздействие физических нагрузок является основой контроля физического состояния спортсмена. Как правило, используются такие общепринятые и доступные тесты, как измерение веса тела, частоты сердечных сокращений, артериального давления, которые не позволяют выявить тонкие изменения метаболических реакций. Но именно такие тонкие изменения представляют интерес на современном этапе развития спортивной медицины. Известно достаточно много работ, посвященных определению уровня различных метаболитов, гормонов, ферментов в организме спортсменов [7-9]. Однако выбор исследуемого материала для биохимических исследований довольно ограничен: венозная и капиллярная кровь, моча. Причем забор образцов крови у спортсменов связан с некоторыми проблемами (болевые ощущения, условия стерильности и т.п.), а забор мочи сопровождается определенными, так сказать, эстетическими неудобствами. В связи с вышесказанным представляется привлекательным использование такого доступного материала, как экскреты кожной поверхности спортсмена, получаемые простым смывом с определенных участков кожи. Если тщательно стандартизировать процедуру такого смыва, можно получить достаточно воспроизводимые и надежные результаты.

Роль кожи как экскреторного органа, на наш взгляд, недооценивается исследователями, работающими в сфере биохимии и физиологии спорта. Через кожу достаточно интенсивно выделяются минеральные соли, низшие жирные кислоты, азотистые шлаки и т.п. Можно ожидать, что нарушения обмена веществ, вызванные, например, интенсивными тренировками, неизбежно приведут к сдвигам уровня метаболитов, экскретируемых кожей, и изменения можно выявить с помощью соответствующих аналитических методов. В настоящей работе, в частности, предлагается простая процедура определения ряда азотистых шлаков (мочевины, аминоазота, креатинина), а также молочной кислоты в смывах с ладонной поверхности человека,

Методическая часть. Забор пробы. На ладонную поверхность кисти руки (в ладонную ямку) наносится 3 мл дистиллированной воды, экстракция продолжается в течение 2 мин с осторожным покачиванием ладони. Затем этот водный экстракт сливается в пробирку (или отсасывается пипеткой). К 2 мл полученного экстракта добавляется 0,05 мл 0,4 М раствора хлорида железа, сразу же происходит окрашивание в бледно-желтый цвет из-за присутствия в кожном экстракте молочной кислоты (реакция Берга). Проба колориметрирует-ся при 440 нм против пробы "вода+хлорид железа" на фотоколориметре КФК-2 или другой марки. Полученные единицы оптической плотности переводятся в мкмоли лактата с помощью предварительно построенной калибровочной кривой. В качестве калибровочного стандарта можно использовать 0,01 М раствор лактата лития или тартрата калия-натрия (сегнетовой соли). Определив площадь смачиваемой поверхности ладони (9-10 см²), пересчитываем на содержание молочной кислоты на 1 см². После определения лактата проба не выбрасывается, а делится на две части (0,2 мл и 1,8 мл). Меньшая порция доводится до 1 мл водой и в ней определяется содержание экскретируемой мочевины с помощью цветной реакции с диметил-глиоксимом и тиосемикарбазидом [1, 2]; в большей же порции пикратным методом определяется содержание креатинина [3]. Следует заметить, что в связи с низким уровнем экскреции креатинина, а также невысокой чувствительностью пикратного метода результаты анализов экскретируемого креатинина были недостатчно воспроизводимы. Более надежным методом определения креатинина на коже можно считать вариант, опубликованный нами в 1993 г., в котором использовался смыв с фаланг пальцев руки [3].

Уровень молочной кислоты и некоторых азотистых шлаков на ладонной поверхности человека

Примечание Данные третьей колонки рассчитаны с допущением что общая поверхность кожи человека составляют 1 5 м2 а интенсивность экскреции на всех участках кожи существенно не отличается в связи с этим приведенные величины следует считать ориентировочными Масса аминоазота (650 мг) получена из расчета что молекулярная масса аминокислот экскретируемых кожей в среднем равна 130

Оставшийся 1 мл исходного экстракта либо целиком использовался для анализа аминоазота (суммы экскретируемых аминосоединений) с помощью нингидриновой реакции [4, 5], либо делился на две равные части и в последних определяли аминоазот и аммиак. Для определения аммиака использовали цветную реакцию Бертло [6].

Результаты и их обсуждение. В таблице представлены результаты, полученные в смывах с ладонной поверхности до утреннего туалета (8-9 ч утра).

Полученные результаты отражают уровень кожной экскреции исследуемых соединений в состоянии покоя (сразу после ночного сна). Естественно, что разнообразные внешние воздействия, как, например, водные процедуры, физические упражнения, прием пищи, а также атмосферные факторы (температура воздуха, влажность и т.п.), существенно влияют на экскреторную функцию кожи и являются причиной заметного разброса результатов. Изучение этих воздействий на кожную экскрецию вышеуказанных веществ будет предметом дальнейшей работы. Основная же цель настоящей статьи - показать возможность количественного определения в одной пробе 4-5 метаболитов, выделяющихся через кожу. При аккуратном соблюдении постоянства условий забора проб воспроизводимость результатов достаточно хорошая. Следует подчеркнуть простоту и безболезненность процедуры, возможность забора проб, так сказать, в полевых условиях с последующим их анализом в лаборатории. Неинва-зивность метода позволяет применять его при изучении детского контингента, а также получать образцы для анализа, многократно исследуя динамику метаболических изменений в организме спортсмена. Время от забора пробы до получения всех пяти показателей при рациональной организации работы - не более 30-40 мин, а в отношении молочной кислоты результат может быть получен уже через 3-4 мин (смыв с кожи - добавление хлорного железа - фотоколориметрия). Описанная методика, на наш взгляд, может найти применение также в лабораторном практикуме для студентов биологического профиля, в том числе и для студентов институтов физкультуры.

Литература

1. Колориметрические методы анализа азотистых соединений (сост В А. Храмов, Волгоград, 1979).

2. Храмов В.А., Галаев Ю.В. "Вопр. мед. химии", 1969, № 15, с 435-439.

3. Храмов В.А. Простой метод определения креатинина, экскретируемого кожей человека Деп. ВИНИТИ, № 474В, 25.02.93.

4. Храмов В.А., Агеева Е.М. "С/х биологии", 1986, № 10, с. 122-124.

5. Храмов В.А., Уртенова З.Ю. "Теор. и практ. физ. культ.", 1987, № 8, с. 20-21.

6. Храмов В.А. "Лаб. дело", 1965, № 7, с. 396-399.

7. Limon P.W.R. "Med. Sci ш Sport Exercise", 1987, v. 19, No 5, p. 179-190

8. Brooks G.A. "Med Sci in Sport Exercise", 1987, v 19, No 5, p 150-156.

9. Lijnen Р. et al. "Enzyme", 1985, v 33, p. 134-142.

Поступила в редакцию 04.04.95

  На главную    В библиотеку    Обсудить в форуме 

При любом использовании данного материала ссылка на журнал обязательна!
 

Реклама: